引言
假期就要到了,是不是想要好好放松一下呢?但別忘了,我們的實驗室小伙伴也需要一個“假期”哦!
色譜柱是液相色譜中的核心部件,就像人的心臟一樣重要。它的“心臟”就是固定相,固定相的作用是吸附樣品中的組分,使它們得以分離。因此,保持色譜柱的清潔對于實驗結果至關重要。今天就讓我們一起給色譜柱“洗個澡”,讓它煥然一新吧。
SEC色譜柱
保存方法
日常使用中,賽分科技 SEC色譜柱建議保存在150 mM磷酸鈉緩沖液中(pH 7.0)。如長期不用時,則需將色譜柱保存在含0.02% NaN3的150 mM磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)或20%乙醇中,以防止菌體污染。
清洗、再生方法
多次使用后某些樣品可能會吸附到入口篩板或填料上,當積累至一定程度時會出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰型展寬的現(xiàn)象,此時需要清洗色譜柱。
一般流程為:斷開檢測器,反接色譜柱,在低于50%最大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。
推薦清洗溶液有:
1 0.5 M硫酸鈉溶液(pH 3.0):適用于堿性蛋白吸附后的清洗;
2 10%-20%有機溶劑(乙醇、異丙醇、乙腈):疏水性蛋白吸附后的清洗;
3 以上清洗方法無效時,可使用4 M尿素(pH 7.0):適用于易聚集蛋白樣品的清洗。
IEX色譜柱
保存方法
長期不用時,請將Proteomix SAX和WAX柱保存在含0.1%NaN3的20 mM Tris緩沖液(pH 8.0)中。Proteomix SCX 和WCX柱保存在含 0.1%NaN3的20 mM磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)中。色譜柱需要用儲存緩沖溶液沖洗至少15倍柱體積。然后再用隨色譜柱附上的兩個可拆卸的堵頭塞緊色譜柱的兩端以防止柱床的干涸。
過年期間,Proteomix陰離子交換色譜柱短期保存在20 mM Tris,(pH 8.0)中。陽離子交換柱保存在20 mM磷酸鹽緩沖液,(pH 6.0) 中。
清洗方法
如果預柱濾片或保護柱在分離之前曾經(jīng)使用過,需要首先將預柱濾片或保護柱反接用清洗溶液沖洗15-30min。如果經(jīng)過沖洗效果沒有得到明顯改善,則需要更換預柱濾片或保護柱。
在使用過程中,樣品經(jīng)常會被吸附在柱入口端的篩板或者填料上。當樣品吸附累積到一定程度時,柱壓將會升高,色譜峰形也會出現(xiàn)展寬。這時就需要清洗色譜柱了。
一般流程為:斷開檢測器,反接色譜柱,在低于50%最大推薦流速下用清洗液沖洗10-15倍柱體積。
推薦清洗溶液有:
1對于一般親水性較好的蛋白樣品,建議采用 1 M NaCl 溶液清洗 10 倍柱體積。
2對疏水性較強的蛋白樣品,建議采用 20%乙醇清洗 10 倍柱體積 。
3對于Proteomix陰離子交換色譜柱,清洗溶液為含150 mM硝酸鉀的75%乙腈溶液(用HCl調節(jié)pH至2)。
4對于Proteomix陽離子交換色譜柱,清洗溶液為含1.0 M NaCl的 50 mM磷酸鹽緩沖液(pH 10)。
再生方法
1 對于陰離子色譜柱(WAX、SAX),建議采用0.1 M的硫酸溶液清洗10 倍柱體積,然后保存到 20 mM Tris(pH 8.0 )中。
2 對于陽離子色譜柱(SCX、WCX),建議采用0.1 M的硫酸溶液或20 mM NaOH清洗 10倍柱體積,然后保存到20 mM磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)中。
怎么樣?是不是覺得給色譜柱“洗澡”也不是一件簡單的事情呢?不過,只要我們用心呵護,它一定會回報我們清晰的色譜峰!假期愉快哦!