引言
CircRNA具有生產(chǎn)成本低、穩(wěn)定性好、蛋白表達(dá)水平高的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也對(duì)核酸外切酶降解具有高抗性，在免疫細(xì)胞治療領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用潛力。T細(xì)胞受體（TCR）工程T細(xì)胞（TCR-T）是治療病毒感染和癌癥的一種很有前途的手段,與傳統(tǒng)CAR-T相比，抗原識(shí)別范圍更廣。這種類型的治療方法在抗病毒與抗腫瘤免疫治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。
近日，賽分科技客戶上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一人民醫(yī)院/上海市第一人民醫(yī)院聯(lián)合蘇州科銳邁德生物醫(yī)藥科技公司在國(guó)際學(xué)術(shù)期刊《Molecular Therapy》在線發(fā)表了關(guān)于circRNA的研究論文（點(diǎn)擊文末閱讀原文可查詢相關(guān)文章）。該研究首次報(bào)道了基于circRNA技術(shù)的TCR-T細(xì)胞療法，為臨床上造血干細(xì)胞移植后人巨細(xì)胞病毒（CMV）感染提供新的、更為安全有效的免疫治療策略。研究人員使用賽分科技產(chǎn)品SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱對(duì)circRNA進(jìn)行純化處理，收率可超過99%，回收后純度高達(dá)96%，這種純度水平在TCR-T細(xì)胞工程的轉(zhuǎn)染過程中至關(guān)重要。
背景介紹
CircRNA細(xì)胞定位準(zhǔn)確，調(diào)節(jié)基因表達(dá)能力強(qiáng)，在疫苗和藥物研發(fā)領(lǐng)域備受關(guān)注。其制備過程中產(chǎn)生的線性RNA雜質(zhì)可能激發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，因此有效去除線性RNA雜質(zhì)、制備高純度circRNA是開展體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的必要條件。
體積排阻色譜法（SEC-HPLC）是circRNA純化的有效方式。其優(yōu)點(diǎn)是容易去除差異較大的RNA片段，比如內(nèi)含子片段。將SEC-HPLC與RNase R酶消化法相結(jié)合，可以擴(kuò)大circRNA、開環(huán)circRNA、線性RNA前體等產(chǎn)物的特性差異，且更具放大潛力，是circRNA大批量純化的首選方案。
文章概述
文章選用賽分科技SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱，通過SEC-HPLC與RNase R酶消化法相結(jié)合的方式，制備得到純度高達(dá)96%的circRNA，可以滿足對(duì)于circRNA純度及收率的要求，在mRNA疫苗的開發(fā)和核酸藥物治療方面潛力巨大。
circRNA純化
色譜柱：SRT SEC-1000 (30×300mm,5 μm,1000Å)
流動(dòng)相：無RNase磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)
流速：15 mL/min
通過峰捕獲和濃縮收集高純度的circRNA， 超離心后用無RNase的水代替緩沖液
圖1.GFP標(biāo)記circRNA表達(dá)和純化
圖1顯示了GFP標(biāo)記的circRNA表達(dá)和純化程度。研究人員對(duì)目標(biāo)為1.9Kb的circRNA進(jìn)行純化處理，與未純化的circRNA（76.8%）相比，采用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱純化后的純度可達(dá)96.0%，收率可達(dá)99.0%。
圖2.編碼PP65特異性TCR的circRNA純化圖譜
圖2總結(jié)了使用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱時(shí)編碼PP65特異性TCR的circRNA的純度，經(jīng)過純化后,純度從58.1%提升為96.6%，收率為98.2%，滿足實(shí)驗(yàn)要求，可用于進(jìn)一步的體內(nèi)/體外驗(yàn)證。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
文章通過使用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱，滿足了circRNA的純化制備要求。這種純化方式與新型TCR-T載體相結(jié)合，會(huì)獲得更安全有效的細(xì)胞轉(zhuǎn)染和蛋白表達(dá)，可廣泛用于未來治療領(lǐng)域。
延展閱讀
賽分科技大孔徑色譜柱已廣泛應(yīng)用于mRNA、circRNA的分析以及高純度樣本制備，可以提供藥物研發(fā)、臨床前、臨床、大規(guī)模生產(chǎn)的制備柱。賽分科技國(guó)內(nèi)外客戶均有采用體積排阻色譜柱用于mRNA樣品分析及制備，并發(fā)表相關(guān)研究文獻(xiàn)，部分摘錄文獻(xiàn)可再次瀏覽。
鏈接：點(diǎn)擊以下文章再次閱讀，通過SEC分析、制備mRNA樣品：
《文獻(xiàn)速遞 | 環(huán)狀mRNA用于癌癥治療》
《文獻(xiàn)速遞 | SRT SEC分離純化環(huán)狀RNA》
《文獻(xiàn)速遞 | 抗SARS-CoV-2和新變異株的環(huán)狀RNA疫苗》
《文獻(xiàn)速遞 | 美國(guó)藥典委員會(huì)發(fā)布mRNA疫苗質(zhì)量分析方案》
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