引言
日常液相色譜分析實(shí)驗(yàn)中，色譜柱的活化是保證實(shí)驗(yàn)順利的關(guān)鍵步驟之一。不正確的活化方式可能造成柱效下降、固定相流失以及基線不穩(wěn)定等負(fù)面情況，影響分析結(jié)果的可靠性，還直接關(guān)系到色譜柱的壽命和儀器的使用性能。本期我們將利用賽分科技不同分離模式的色譜柱，為大家分享一些關(guān)于液相色譜柱活化方面的技巧，幫助大家獲得穩(wěn)定可靠的分析結(jié)果。
SEC色譜柱
活化方法
對(duì)于SEC色譜柱，我們推薦采用流動(dòng)相以低流速?zèng)_洗色譜柱約10-20倍柱體積，再逐漸升高至預(yù)計(jì)的操作流速。
如果流動(dòng)相中有機(jī)相比例超過(guò)20%，建議先用純水以低流速?zèng)_洗2-5倍柱體積，再進(jìn)行轉(zhuǎn)換，以避免鹽析出。若選擇粘度/背壓更高的溶劑，如IPA，EtOH，則需要采用更低的流速。
流速的選擇通常與色譜柱尺寸規(guī)格和填料粒徑大小有關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，為確保最佳分離效果，色譜柱粒徑越小，活化時(shí)使用的流速會(huì)越低。同時(shí)，在線速度相同的情況下，色譜柱活化時(shí)使用的流速和色譜柱內(nèi)徑呈正相關(guān)，即內(nèi)徑越大，流速越高。因此，在確定活化參數(shù)時(shí)，流速的設(shè)置也非常重要。
表1.不同規(guī)格SEC柱活化參數(shù)
表1列舉了不同規(guī)格SEC柱活化的推薦流速，以供參考。在操作時(shí)，建議采用常規(guī)使用流速的1/5作為起始流速，每隔兩到三分鐘增加1/5流速。每次增加流速后，監(jiān)測(cè)其基線和壓力，待穩(wěn)定幾分鐘后，再逐漸提高流速。若加入如IPA等有機(jī)溶劑，流速增幅需要適當(dāng)減小。
注意事項(xiàng)
1對(duì)于水相使用，用流動(dòng)相沖洗色譜柱，同時(shí)逐漸將流速增加到操作流速，使色譜柱壓力平衡，并且基線穩(wěn)定。
2如果使用超過(guò)20%有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相，推薦在平衡時(shí)，采用低流速或者讓流動(dòng)相在色譜柱中過(guò)夜保存。
表2.賽分科技SEC色譜柱部分展示
IEX色譜柱
活化方法
推薦用10-20倍柱體積的流動(dòng)相進(jìn)行沖洗以活化色譜柱。流速由0.1mL/min逐漸升至實(shí)驗(yàn)所需條件，直至基線穩(wěn)定為止。
如果柱壓和基線波動(dòng)較大，可能是氣泡進(jìn)入了色譜柱中。這時(shí)需要斷開(kāi)色譜柱，用較高流速?zèng)_洗2-5min，例如4.6×250mm的色譜柱可采用1.0mL/min流速。
如果流動(dòng)相的類型或pH與色譜柱中緩沖液的pH值差異較大，建議將色譜柱先用新的流動(dòng)相沖洗10倍柱體積。
表3.賽分科技IEX色譜柱部分展示
