今年4月3日，中國ADC藥物研發(fā)公司普方生物以18億美元（約合130億元人民幣）被丹麥生物技術(shù)公司Genmab收購，再一次引發(fā)業(yè)內(nèi)對ADC藥物的關(guān)注。2023年ADC藥物市場爆發(fā)，年總銷售額破百億美元，其中5款藥物躋身10億美元俱樂部，進(jìn)一步展現(xiàn)出ADC藥物市場的火熱。相比于小分子細(xì)胞毒藥物，ADC具有更高的安全性和有效性，在提出“魔法子彈”的理念后，2000年第一款A(yù)DC藥物（Gemtuzumab ozogamicin）上市，至今全球已有15款藥物進(jìn)入市場。ADC的研究已然成為近幾年最火熱的藥物研究領(lǐng)域之一，百余款A(yù)DC藥物處于臨床研究階段，其中據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)國內(nèi)已有超過17個(gè)項(xiàng)目處于臨床后期（表1），預(yù)計(jì)未來3-5年進(jìn)入收獲期。ADC藥物市場份額增長迅速，預(yù)計(jì)到2030年，全球市場將超600億美元（預(yù)估信息來自Frost & Sullivan）。
表1. 國內(nèi)處于臨床后期的ADC項(xiàng)目梳理
數(shù)據(jù)來源：藥融云數(shù)據(jù)庫
抗體偶聯(lián)藥物（Antibody Drug Conjugate，ADC）研發(fā)的火熱得益于技術(shù)的不斷升級，發(fā)展至今ADC藥物歷經(jīng)三代技術(shù)的革新，可以開發(fā)出更有效、安全而穩(wěn)定的藥物分子，在藥效提升的同時(shí)降低藥物副作用。ADC藥物的結(jié)構(gòu)（見圖1）有三個(gè)主要關(guān)鍵組成部分：抗體（Antibody）、連接子（Linker）、毒素分子（Payload）。理想的ADC分子應(yīng)當(dāng)具有高靶向性，精準(zhǔn)結(jié)合目標(biāo)靶點(diǎn)，毒素分子可以從血漿中穩(wěn)定通過并到達(dá)目的地（例如，癌細(xì)胞）再釋放，發(fā)揮毒素分子的作用。因而這三個(gè)組成部分對藥物使用效果都有至關(guān)重要的影響：抗體的靶點(diǎn)選擇、特異性、親和力、內(nèi)化效率，可降解連接子的穩(wěn)定性、不可降解連接子與小分子毒素復(fù)合物對腫瘤細(xì)胞的殺傷力、連接子與抗體的偶聯(lián)方式，以及小分子毒素的選擇是ADC藥物開發(fā)過程中需要主要考量點(diǎn)。
圖1. ADC藥物結(jié)構(gòu)示意圖
隨著抗體制備技術(shù)和偶聯(lián)技術(shù)的不斷進(jìn)步，現(xiàn)階段的ADC候選藥物已經(jīng)克服了一系列問題，如藥物靶向性不足、藥物毒性大、異質(zhì)性高、連接子不穩(wěn)定等。此外，藥物抗體比（drug-antibody ratio，DAR）大于4的ADC存在耐受性低、體內(nèi)療效低以及血漿清除率高的問題，因此優(yōu)化偶聯(lián)技術(shù)，控制DAR值是目前ADC藥物研究的重要方向，而位點(diǎn)特異性偶聯(lián)（site-specific conjugation）技術(shù)是解決ADC藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性DAR的關(guān)鍵。經(jīng)過三代技術(shù)的革新，位點(diǎn)特異性偶聯(lián)技術(shù)逐漸成熟，表1中總結(jié)常見集中偶聯(lián)方式及其特點(diǎn)。此外，偶聯(lián)技術(shù)整體決定可能引入的工藝相關(guān)雜質(zhì)，因而偶聯(lián)技術(shù)的選擇與下游純化方案息息相關(guān)，根據(jù)不同的偶聯(lián)方式可推測出偶聯(lián)后采用的純化方案（表2）。
表2. 常見ADC藥物偶聯(lián)方式及其特點(diǎn)
常見的ADC藥物生產(chǎn)流程及純化工藝，根據(jù)其偶聯(lián)技術(shù)及引入的雜質(zhì)情況可歸納為三類，分別是無需色譜層析，常規(guī)采用UF/DF結(jié)合TFF系統(tǒng)使用；其二，偶聯(lián)工藝中引入酶作為偶聯(lián)試劑，常采用親和加陽離子交換純化；其三，偶聯(lián)反應(yīng)中因?yàn)闂l件變化可能導(dǎo)致ADC聚集，減少聚集體或其他產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，常采用陽離子交換層析。結(jié)合不同的雜質(zhì)類型推薦對應(yīng)的去除策略，采用不同的層析方式，將其總結(jié)為下表（表3），文末可填寫問卷信息申請?jiān)囉谩?/p>
表3. 偶聯(lián)反應(yīng)常見引入雜質(zhì)及去除方法
ADC藥物由抗體與小分子毒素偶聯(lián)，其基本生產(chǎn)流程見圖2，已上市ADC藥物中均以單抗作為ADC靶向偶聯(lián)抗體，毒素分子主要為細(xì)胞毒藥物（已上市藥物主要有微管抑制劑、DNA損傷劑為主），具有強(qiáng)細(xì)胞毒性，進(jìn)入體內(nèi)如果發(fā)生脫靶（off-target）對正常細(xì)胞有較高損傷，因而需要保證ADC藥物中游離細(xì)胞毒分子控制在很低水平且保證ADC較小的脫靶情況，盡可能減小藥物的毒副作用。下游純化是保證藥物質(zhì)量的重要方式，對于不同的偶聯(lián)方式以及產(chǎn)生的對應(yīng)雜質(zhì)，需配合合理的純化工藝以保證終產(chǎn)品的質(zhì)量。
圖2. ADC藥物生產(chǎn)及純化流程
賽分科技推薦對于引入酶的偶聯(lián)方式采用MabPurix系列親和層析配合Monomix Mab60-SP陽離子交換的方式進(jìn)行純化；對于需去除ADC樣品中的聚集體、片段以及電荷異質(zhì)性雜質(zhì)采用陽離子交換層析（Monomix Mab60-SP），可實(shí)現(xiàn)高效純化。另一方面如需控制裸抗含量或者去除DAR值的樣品可嘗試采用疏水層析。
ADC藥物偶聯(lián)后純化填料簡介
Monomix MC30-HIC Butyl疏水層析填料
ADC偶聯(lián)后存在不同DAR值樣品具有疏水性差異，理論上可選擇疏水層析介質(zhì)用于純化不同DAR樣品。實(shí)際操作中，疏水層析填料需要極高的分辨率（小粒徑填料）才能保證分離不同的DAR值的樣品。下表為Monomix MC30-HIC Butyl疏水層析填料技術(shù)參數(shù)，可用于富集目標(biāo)DAR值A(chǔ)DC樣品。
介質(zhì)特點(diǎn)
高機(jī)械穩(wěn)定性，良好的耐壓性能
適中的疏水性
高化學(xué)穩(wěn)定性，可耐受pH 2-13
高分辨率、高回收率
表4. Monomix MC30-HIC Butyl疏水層析填料技術(shù)參數(shù)
Monomix Mab60-SP離子交換填料
Monomix Mab60-SP為強(qiáng)陽離子交換填料，具有高分辨率、高載量，對于ADC藥物中裸抗以及偶聯(lián)后藥物的純化均應(yīng)用廣泛，下表為Monomix Mab60-SP填料的技術(shù)參數(shù)。將填料保存于DMSO溶劑中一周后再測試其DBC，結(jié)果顯示無顯著變化（100.2%），該填料對DMSO表現(xiàn)出有良好的溶劑耐受性。
介質(zhì)特點(diǎn)
高結(jié)合載量和極好的生物相容性
剛性基質(zhì)可耐受高壓和高流速
高分辨率、高柱效和高回收率
易于放大
高度親水性表面，可忽略的非特異性吸附
常規(guī)裝柱條件下，體積變化小
表5. Monomix Mab60-SP離子交換填料技術(shù)參數(shù)
MabPurix A65 Excel親和層析填料
裸抗與毒素分子偶聯(lián)方案中采用酶的情況下，多采用親和+離子交換的方法純化ADC藥物。MabPurix A65 Excel具有高載量、高回收率，對于單抗、雙抗以及ADC樣品具有良好的純化效果，表6為該填料產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)。
介質(zhì)特點(diǎn)
高載量,其中A65 Excel動(dòng)態(tài)載量高達(dá)70 mg hlgG/mL resin
低Protein A脫落，高HCP去除效率
高交聯(lián)度，耐壓達(dá)0.3 MPa
有效去除聚集體，降低后續(xù)純化壓力
填料反壓低，易于放大
表6. MabPurix A65 Excel親和填料技術(shù)參數(shù)
*參考文獻(xiàn)：
[1] Matsuda Y. Current approaches for the purification of antibody–drug conjugates. J Sep Sci. 2022;45:27–37.
[2] Fu Z, et al. Antibody drug conjugate: the"biological missile"for targeted cancer therapy. Signal Transduction and Targeted Therapy, 2022(004):007.
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