美國藥典委員會(USP)擁有200余年歷史的藥品標準制定經驗，在保證上市藥品質量標準的同時，引領新型生物制品的研發(fā)與創(chuàng)新。通過召集新興技術領域的行業(yè)和科學專家，編纂最佳實驗方案，在行業(yè)內受到一致認可。
病毒載體是目前用于DNA遞送的有效機制，可用于基因療法以及疫苗研發(fā)，為促進該技術藥物的快速發(fā)展，達成質量檢測共識，USP近期推出病毒載體疫苗質量控制草案。文中提到采用賽分科技的體積排阻色譜柱SRT SEC-1000聯合使用MALS用于檢測總的病毒衣殼顆粒。
背景介紹
近年來，隨著新冠疫情的爆發(fā)，多個國家和機構也開發(fā)了基于病毒載體的新冠疫苗(如牛津-阿斯利康Vaxzevria，中國康希諾生物 Convidecia等)，在防止新冠疫情的擴散中發(fā)揮了重要的作用。全球對此類產品的需求在不斷提升，該類產品的質量控制急需完善。
病毒載體疫苗本身具有相對復雜的結構，可分為兩個部分對其質量進行研究：其一，負責編碼激發(fā)免疫反應相關蛋白質的DNA；其二，則是病毒載體，而修飾的腺病毒應用最為廣泛。每個組分的質量屬性和潛在的雜質需要分析，此外還需要評估成品的空殼率，因而制定合適的分析方法是保證質量可靠的關鍵。
另一方面，病毒載體疫苗快速發(fā)展，并且成功應用于疾病的預防，加速對其質量控制的需求。如果沒有一套共同的方法來確定質量，醫(yī)藥企業(yè)必須開發(fā)他們自己的內部方法，分散在產品創(chuàng)新上的注意力和資源，質量標準不能達成共識。因而，美國藥典委員會搜集相關分析方法并發(fā)布此草案，推動病毒載體疫苗產品發(fā)展。
文章概述
草案介紹了病毒疫苗載體的相關質量檢測方法，分為鑒別（DNA序列、病毒衣殼）、效力（轉基因表達、病毒滴度）、含量（總病毒衣殼顆粒）、純度（載體聚體、空殼率、殘留宿主DNA）等幾個方面。針對不同的質量屬性控制指標提出相關的分析方法。這些方法經過USP生物科學專家委員會的審查，將成為行業(yè)重要的參考指南和技術資源?，F今，為了進一步完善和提高指南中的內容，USP正在征集指南草案的反饋意見，有助于提高病毒載體類疫苗產品質量。意見征集將在2022年7月31日截止，屆時該草案方法將正式確認。
草案中提到采用體積排阻色譜聯合多角度光散射檢測器（SEC-MALS）用于含量檢測項，具體實驗方法如下：
磷酸緩沖溶液（2×PBS）：9.0 g氯化鈉，1.09 g磷酸氫二鈉，0.32 g 磷酸二氫鉀，于蒸餾水中溶解并稀釋至100 mL
溶液A：2×PBS+10%乙醇
樣品濃度：濃度范圍5×10^10~1×10^15 capsids/mL
檢測模式：液相色譜
檢測器：UV，260 nm及280 nm；MALS；DRI串聯
色譜柱：賽分科技 SRT SEC-1000，4.6 mm×300 mm
色譜柱溫度：25℃
樣品溫度：4℃
流速：0.35 mL/min
?。ㄔ募袨?.0 mL/min，由于該方法參考拜瑪琳制藥（BioMarin）發(fā)表文獻方法，經與客戶確認流速應為0.35 mL/min，目前正在聯系USP進行更正）
分析方法：分析時MALS和DRI信號必須歸一化，采用“球”模型計算平均摩爾質量及其質量分布，衣殼蛋白和包裹DNA的固有dn/dc值分別為0.185和0.170。
延展閱讀
賽分科技大孔徑色譜柱已廣泛應用于腺相關病毒載體（AAV）的檢測。此前文獻速遞欄目中，賽分科技美國客戶BioMarin在自然雜志子刊《Scientific Reports》上發(fā)表文章，介紹了利用賽分科技SRT SEC-1000體積排阻柱有效分離AAV衣殼單體、聚體及聯用MALS測定AAV衣殼及載體基因組，使其成為基因治療工程中產品開發(fā)和過程分析的重要工具。
賽分科技客戶賽諾菲在《Human Gene Therapy》上發(fā)表了文章，利用賽分科技SRT SEC-500開發(fā)出雙波長檢測 (SEC-DW) AAV 樣品的完整殼百分比的方法，可作為參考方法。
賽分科技客戶REGENXBIO在《Journal of Pharmaceutical Sciences》雜志上發(fā)表的文章中提到SRT SEC-1000應用于AAV中游離DNA和聚體的檢測。
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