隨著抗體研發(fā)技術進步,特別是人源化小鼠和噬菌體/酵母庫方法的出現(xiàn),可以開發(fā)出大量不同類型的抗體樣品,為了能夠快速篩選出具有可開發(fā)研究性能的樣品,對于快速、高效制備高純度樣品提出更高要求。
賽分科技客戶禮來(Eli Lilly and Company)在《MABS》雜志發(fā)表題為《Development of a robust and semi-automated two-step antibody purification process》文章,文中采用親和層析及體積排阻制備柱 SRT-10C SEC-300建立快速、高效獲取高純度抗體的方法,同步解決內毒素清除問題,大大提升純化效率,有利于快速推進實驗進程。
背景介紹
抗體研發(fā)技術壁壘逐漸被打破,針對同一靶點可以開發(fā)成百上千的抗體分子,對于該分子能否成藥需要制備一定量的樣品進行快速篩選,用以評估其可開發(fā)性(developability)以及工藝可行性(manufacturability)。此前,采用孔板純化(plate-based purification)的方式不能夠提供足夠量的高純度抗體樣品支持后續(xù)研究。因此,需要開發(fā)快速制備一定量高純度樣品的方法,樣品量約為10-100 mg稱為“mid-scale”,可足夠用于細胞基質實驗、體內藥效實驗以及生物物理性質研究等,初步篩選出目標分子。
文章概述
文章報告了一種抗體的高效純化方式,采用Protein A親和捕獲聯(lián)合體積排阻精制的純化流程制備高純度抗體樣品。體積排阻分離選擇瓊脂糖基質Superdex 200及硅膠基質的SRT-10C SEC-300兩款產(chǎn)品進行對比分析,根據(jù)產(chǎn)品特性,選擇合適的流速條件進行實驗,得到結果(表1)顯示賽分科技SRT-10C SEC-300具有較高的分離度,精制的抗體樣品具有更高的收率和相當?shù)募兌?,流速可達7.5 mL/min,且具有更快的分離速度,很大程度上減少研發(fā)時間。因而,第二步抗體精制選擇SRT-10C SEC-300制備柱。
表1 SRT-10C SEC-300與Superdex 200純化效果對比
另一方面,在細胞基質實驗以及體內研究等要求很低的內毒素含量,因而在純化過程中需要解決內毒素去除的問題。針對于此,文中提出了解決方案,考察不同濃度的異丙醇(IPA)作為CIP(clean-in-place)溶液對體積排阻精純過程中內毒素的清除效果。結果(表2)表明采用≥25%異丙醇溶液作為CIP溶液可將內毒素清除95%。為驗證該方案的可行性,考察了約350種抗體樣品內毒素去除情況,結果顯示,其內毒素均值可控制在0.8 EU/mg,97%的樣品內毒素控制在3 EU/mg。
表2 不同濃度IPA對抗體樣品內毒素清除效果
圖1 約350種抗體樣品內毒素清除檢測結果
該文章介紹了完整的抗體純化方法,采用親和捕獲以及體積排阻兩步半自動化的純化方式,經(jīng)對比分析,選擇SRT-10C SEC-300作為精純步驟,該方法可在20 h內純化24~48個抗體樣品,每個純化后的樣品可達80 mg,滿足高通量篩選需求。同時考察樣品內毒素去除情況,保證了樣品的質和量。經(jīng)過驗證,該半自動化兩步抗體純化方法可以廣泛應用。
延展閱讀
此前文獻速遞欄目,介紹SRT-10C體積排阻色譜產(chǎn)品還可應用于納米抗體的純化。賽分科技長期客戶蘇黎世大學和Linkster Therapeutics聯(lián)合在《自然》雜志子刊《Nature Protocols》上發(fā)表的文章中提到SRT-10C SEC-100制備柱應用于納米抗體的純化,可有效降低色譜峰拖尾問題,提高純化效果。
[1] Xiaomin Yang, Richard Yuan, Christopher Garcia, Jessica Berry, Denisa Foster, Dongmei He, Gui-Feng Zhang & Bryan E. Jones (2021) Development of a robust and semi-automated two-step antibody purification process, mAbs, 13:1, 2000348, DOI:10.1080/19420862.2021.2000348
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