抗體是免疫系統(tǒng)中一類重要的蛋白質,它們通過特異性方式來結合抗原。這一特性使之在診斷、治療、基礎研究等方面具有巨大的價值??贵w由四條多肽鏈構成,兩條重鏈和兩條輕鏈,通過二硫鍵連接而成。它們通常被糖基化,其中羧基端區(qū)域高度保守,而氨基端區(qū)域在氨基酸序列上可變,從而產(chǎn)生抗體的特異性和多樣性。
在一系列的酶切和化學處理下,抗體分子被裂解為各種片段,通過HPLC分離,結合電泳和質譜等手段,抗體的結構可被了解和鑒定。近日,賽分科技的科學家通過體積排阻色譜、離子交換色譜和反相色譜等多種技術實現(xiàn)抗體異構體、各種抗體碎片的高效分離,可對抗體結構進行可靠的鑒定和驗證。此外,為抗體藥物的質量控制也提供了有效的監(jiān)控手段。
一、結構研究
體積排阻色譜法(Zenix™ SEC)
抗體片段重鏈和輕鏈的分離 | 抗體片段Fc和Fab的分離 |
離子交換色譜法(Antibodix™ WCX)
抗體片段Fc和Fab的離子交換色譜法分離
反相色譜法(Bio-C8)
Column: Bio-C8 4.6 x 100 (3 μm, 300 Å, 4.6 x 100 mm); Mobile Phase A: 0.11% TFA in water; Mobile Phase B: 0.09% TFA in ACN; Flow: 0.5 mL/min; Temperature: 75 oC; Detection: UV 280 nm | |
抗體片段重鏈和輕鏈的反相色譜法分離 |
二、抗體異構體分析
Column: Antibodix™ WCX NP5 4.6 x 250 mm; Mobile phases: A: 20 mM sodium acetate, pH 5.15, B: A + 1 M LiCl; Flow rate: 0.8 mL/min; Detection: UV 280 nm. | |
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