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  • Monomix MC-NTA IMAC 親和填料

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      Monomix MC-NTA IMAC填料是一種金屬親和層析填料,適用于純化組氨酸(His)標(biāo)簽的重組蛋白,這類重組蛋白廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。該填料以親水性聚甲基丙烯酸酯微球為基質(zhì),粒徑為60 μm,孔徑為1000 Å,具有較高的物理和化學(xué)穩(wěn)定性。填料表面具有高度親水性,最大程度地避免了與生物類樣品的非特異性吸附。在親水性表面,以專有連接物鏈接了能螯合多價金屬離子的羧酸基團。

      Monomix MC-NTA IMAC填料有兩種類型:游離酸型 (Monomix MC-NTA CA)和螯合鎳離子型 (Monomix MC-NTA Ni)。游離酸型可用于金屬離子去除,也可根據(jù)客戶要求定制其他金屬離子型填料。這兩種類型的IMAC填料結(jié)構(gòu)如下圖所示。Monomix MC-NTA IMAC填料可重復(fù)使用。

    填料結(jié)構(gòu)

    圖 1. Monomix MC60-NTA 化學(xué)組成示意圖

    1.png
    Monomix MC60-NTA Ni

    22.png
    Monomix MC60-NTA CA

     

    圖2. Monomix MC60-NTA Ni壓力-流速曲線

    1.png

      建議使用純水或NaCl溶液裝柱;常用線性流速下,Monomix MC60-NTA Ni填料背壓低

    填料穩(wěn)定性

      該填料化學(xué)穩(wěn)定高,可耐受0.1-0.5 M NaOH溶液清洗循環(huán)。該填料不耐EDTA及DTT。使用一段時間后需重新補充金屬離子。

    技術(shù)參數(shù)
    填料類型
    Monomix MC60-NTA Ni
    Monomix MC60-NTA CA
    基質(zhì)
    親水性聚甲基丙烯酸酯
    粒徑
    60 µm
    孔徑
    1000 Å
    組氨酸標(biāo)記蛋白(His-protein) 載量/離子交換當(dāng)量
    ≥35 mg/mL 填料
    >100 μeq./mL(羧酸含量)
    最大線性流速
    ≤1800 cm/h
    操作溫度
    ≤40°C
    pH適用范圍
    1-13
    操作壓力
    ≤1 MPa(10 bar)
    流動相兼容性
    水溶液,或水和乙腈、丙酮或甲醇的混合物。常用緩沖液:磷酸鹽、三羥甲基氨基甲烷(Tris)和醋酸鹽,也與6 M鹽酸胍、8 M尿素相容
    期保存方法
    50% (v/v) ,保存于20%乙醇中
    再生 EDTA脫去Ni 離子后,用0.1-0.5 M的NaOH 溶液清洗干凈,重新補充Ni 離子 EDTA脫去金屬離子,用0.1-0.5 M的NaOH 溶液清洗干
    清洗
    0.1 M NaOH清洗

    應(yīng)用案例

    2.jpg

    圖3. Monomix MC60-NTA Ni純化組氨酸標(biāo)記蛋白

    上樣:樣品泵進樣30mg/mL,柱留時間5min,UV280nm信號值20mAU-20mAU收集。5min駐留時間。

    淋洗:使用50mM PB,1M NaCl,pH8.0沖洗層析柱5CV,UV280nm信號值20mAU-20mAU收集。5min駐留時間。

    再平衡:使用平衡液50mM PB,200mM NaCl,pH8.0再平衡層析柱3CV,5min駐留時間。

    洗脫:使用洗脫液( 50mM PB,200mM NaCl,500mM 咪唑,pH8.0)洗脫,8CV,5min駐留時間。UV280nm信號值20mAU-20mAU收集。

    2.jpg

    圖4. 組氨酸標(biāo)記蛋白SEC純度

    Column: Zenix SEC-300 (3μm, 300 Å, 4.6×300 mm)

    Mobile phase: 150mM PB,pH 7.0

    Flow rate: 1mL/min

    Detector: UV 280 nm

    Column temperature: 25 ℃

    應(yīng)用圖譜

    產(chǎn)品名稱 粒徑(µm) 訂貨號
    Monomix MC60-NTA CA 60 285560950
    Monomix MC60-NTA Ni 60 285460950
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