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    產(chǎn)品信息產(chǎn)品應用訂購信息資料下載了解更多
    • 快速的抗體滴度測定
      流速快達 3 mL/min
      總循環(huán)(含平衡)時間可小于0.5 min
    • 線性響應范圍高達40 mg/mL
      UV 280 nm: 0.029 - 7.50 mg/mL, LOD 0.294 µg
      UV 300 nm: 0.117 - 40.0 mg/mL
    • 耐用性: > 2000次進樣
    • 重現(xiàn)性: 優(yōu)良的批間一致性
    • 適用于不同含量的CHO細胞中蛋白的含量測定
    • 兼容HPLC、UPLC 和FPLC 系統(tǒng)

      ProAqa Excel親和色譜柱專門適用于細胞系篩選或上游生物工藝優(yōu)化和質(zhì)量控制過程中快速準確的單克隆抗體定量。填料是由平均粒徑20 µm、孔徑1000-2000 Å的均一的PS/DVB填料顆粒與重組蛋白A配體偶聯(lián)而成,該配體能與除IgG3以外的免疫球蛋白以及含F(xiàn)c的融合蛋白結(jié)合。填料具有機械強度,可以承受高流速和高壓操作。

    技術參數(shù)
    ProAqa Excel 參數(shù)
    填料基質(zhì)(粒徑, 孔徑) 均一的 PS/DVB(20 µm, 1000-2000 Å)
    固定配體 重組蛋白A
    色譜柱尺寸(內(nèi)徑×長度) 2.1 mm x 30 mm
    色譜柱材質(zhì) 不銹鋼
    最大壓力 200 bar
    pH 范圍 1.2-13.0
    最大流速 5 mL/min
    推薦流速 1-3 mL/min
    CIP 0.1 M NaOH
    結(jié)合緩沖液 pH 6.6-7.5
    壽命 >2000次進樣
    標準進樣量 10 µL
    IgG 檢測濃度 0.029-40 mg/mL*
    LOD 0.29 µg

    (*UV 280 nm: 0.029 -7.500 mg/mL, UV 300 nm: 0.117-40.000 mg/mL)

    1.jpg

    圖1. ProAqa Excel 填料掃描電鏡圖

    均一的Sepax填料顆粒(20 µm) D90/D10<1.3

    空白對照

      要使用高純度的緩沖液,緩沖液使用前需要排氣和過濾(0.22 μm)。進樣前,請務必做空白對照,并仔細檢查峰積分結(jié)果中是否存在噪音或基線繪制不正確。為了降低結(jié)合緩沖液和洗脫緩沖液轉(zhuǎn)變時引起的基線波動,建議使用:

     ?。╝)50 mM磷酸鹽(pH 7.0),0.15 M NaCl作為起始/沖洗溶液。

     ?。╞)100 mM磷酸鈉,0.15 M NaCl(pH 2.5)或100 mM甘氨酸,0.15 M NaCl(pH 2.5)作為洗脫緩沖液。

      這些是對信號噪音最小化最有效的洗滌/洗脫液。鹽酸(HCl)能使抗體變性,所以洗脫產(chǎn)品如果需要生物活性的話,不建議添加HCl。

    起始/沖洗溶液

     ?。╝)大多數(shù)情況下,可以使用簡單的緩沖液,例如10-100 mM的磷酸鹽或Tris。

     ?。╞)結(jié)合/洗脫緩沖液的pH范圍為6.0-7.5,但是請注意,在較高的pH范圍下結(jié)合力最強。

     ?。╟)添加一些鹽(0.1-0.2 M NaCl或KCl)抑制蛋白間相互作用的非特異性吸附。

    洗脫條件

      對于分析應用,使用25-100 mM磷酸鹽(pH 2.0-3.5),含或不含高達150 mM的NaCl??梢允褂玫钠渌疵摼彌_液成分包括磷酸鈉、鹽酸、甘氨酸、檸檬酸鹽、醋酸鹽以及其他含低pH成分的緩沖液。

      由于抗體的結(jié)合/洗脫行為因種類和亞類而異,因此應憑經(jīng)驗確定最佳洗脫條件。

    樣品準備和上樣

      為了保證高效結(jié)合和避免柱子濾片堵塞,樣品一般按以下方式準備:

     ?。╝)溶解或交換樣品到起始/洗滌緩沖液,這對于大份樣品(大于25%柱體積)尤其重要。

     ?。╞)進樣前離心或用0.22 μm濾膜過濾樣品。

     ?。╟)熱處理血清樣品(56℃加熱30 min)去除殘留的纖維蛋白原,它們會在多次運行中阻塞色譜柱。

     ?。╠)盡可能對樣品脫脂,因為脂質(zhì)會引起不可逆的結(jié)垢。

      為保證高效結(jié)合及避免填料和色譜柱污染,需要確認上樣量:

      (a) 圖2和圖3顯示了ProAqa Excel色譜柱的動態(tài)測試范圍。

      (b) 其他抗體的結(jié)合能力取決于抗體來源和亞類。

     ?。╟) 需要優(yōu)化結(jié)合和洗脫條件并用樣品確認,以確保達到最夠的結(jié)合平衡和完全洗脫。

      (d) 在分析應用中,最小和最大載量應該通過標準曲線的線性確定(如圖2所示,對于樣品濃度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析,可以將檢測波長設置為280 nm。如圖3所示,如果樣品濃度較高(高達40 mg/mL),波長可設置為300 nm。在該分析應用中,建議使用雙波長檢測(280 nm和300 nm)。

    應用圖譜

    規(guī)格 內(nèi)徑×長度 (mm×mm) 材質(zhì) 柱體積(mL) 訂貨號
    標準規(guī)格
    2.1×30 不銹鋼 0.1 271120980-2103S
    定制規(guī)格
    2.1×50 不銹鋼 0.17 271120980-2105S
    4.6×35 不銹鋼 0.58 271120980-4603S
    4.6×50 不銹鋼 0.83 271120980-4605S
    4.6×100 不銹鋼 1.66 271120980-4610S
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