ProAqa Excel親和色譜柱專門適用于細胞系篩選或上游生物工藝優(yōu)化和質(zhì)量控制過程中快速準確的單克隆抗體定量。填料是由平均粒徑20 µm、孔徑1000-2000 Å的均一的PS/DVB填料顆粒與重組蛋白A配體偶聯(lián)而成,該配體能與除IgG3以外的免疫球蛋白以及含F(xiàn)c的融合蛋白結(jié)合。填料具有機械強度,可以承受高流速和高壓操作。
ProAqa Excel | 參數(shù) |
---|---|
填料基質(zhì)(粒徑, 孔徑) | 均一的 PS/DVB(20 µm, 1000-2000 Å) |
固定配體 | 重組蛋白A |
色譜柱尺寸(內(nèi)徑×長度) | 2.1 mm x 30 mm |
色譜柱材質(zhì) | 不銹鋼 |
最大壓力 | 200 bar |
pH 范圍 | 1.2-13.0 |
最大流速 | 5 mL/min |
推薦流速 | 1-3 mL/min |
CIP | 0.1 M NaOH |
結(jié)合緩沖液 pH | 6.6-7.5 |
壽命 | >2000次進樣 |
標準進樣量 | 10 µL |
IgG 檢測濃度 | 0.029-40 mg/mL* |
LOD | 0.29 µg |
(*UV 280 nm: 0.029 -7.500 mg/mL, UV 300 nm: 0.117-40.000 mg/mL)
均一的Sepax填料顆粒(20 µm) D90/D10<1.3
要使用高純度的緩沖液,緩沖液使用前需要排氣和過濾(0.22 μm)。進樣前,請務必做空白對照,并仔細檢查峰積分結(jié)果中是否存在噪音或基線繪制不正確。為了降低結(jié)合緩沖液和洗脫緩沖液轉(zhuǎn)變時引起的基線波動,建議使用:
?。╝)50 mM磷酸鹽(pH 7.0),0.15 M NaCl作為起始/沖洗溶液。
?。╞)100 mM磷酸鈉,0.15 M NaCl(pH 2.5)或100 mM甘氨酸,0.15 M NaCl(pH 2.5)作為洗脫緩沖液。
這些是對信號噪音最小化最有效的洗滌/洗脫液。鹽酸(HCl)能使抗體變性,所以洗脫產(chǎn)品如果需要生物活性的話,不建議添加HCl。
?。╝)大多數(shù)情況下,可以使用簡單的緩沖液,例如10-100 mM的磷酸鹽或Tris。
?。╞)結(jié)合/洗脫緩沖液的pH范圍為6.0-7.5,但是請注意,在較高的pH范圍下結(jié)合力最強。
?。╟)添加一些鹽(0.1-0.2 M NaCl或KCl)抑制蛋白間相互作用的非特異性吸附。
對于分析應用,使用25-100 mM磷酸鹽(pH 2.0-3.5),含或不含高達150 mM的NaCl??梢允褂玫钠渌疵摼彌_液成分包括磷酸鈉、鹽酸、甘氨酸、檸檬酸鹽、醋酸鹽以及其他含低pH成分的緩沖液。
由于抗體的結(jié)合/洗脫行為因種類和亞類而異,因此應憑經(jīng)驗確定最佳洗脫條件。
為了保證高效結(jié)合和避免柱子濾片堵塞,樣品一般按以下方式準備:
?。╝)溶解或交換樣品到起始/洗滌緩沖液,這對于大份樣品(大于25%柱體積)尤其重要。
?。╞)進樣前離心或用0.22 μm濾膜過濾樣品。
?。╟)熱處理血清樣品(56℃加熱30 min)去除殘留的纖維蛋白原,它們會在多次運行中阻塞色譜柱。
?。╠)盡可能對樣品脫脂,因為脂質(zhì)會引起不可逆的結(jié)垢。
為保證高效結(jié)合及避免填料和色譜柱污染,需要確認上樣量:
(a) 圖2和圖3顯示了ProAqa Excel色譜柱的動態(tài)測試范圍。
(b) 其他抗體的結(jié)合能力取決于抗體來源和亞類。
?。╟) 需要優(yōu)化結(jié)合和洗脫條件并用樣品確認,以確保達到最夠的結(jié)合平衡和完全洗脫。
(d) 在分析應用中,最小和最大載量應該通過標準曲線的線性確定(如圖2所示,對于樣品濃度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析,可以將檢測波長設置為280 nm。如圖3所示,如果樣品濃度較高(高達40 mg/mL),波長可設置為300 nm。在該分析應用中,建議使用雙波長檢測(280 nm和300 nm)。
規(guī)格 內(nèi)徑×長度 (mm×mm) | 材質(zhì) | 柱體積(mL) | 訂貨號 |
---|---|---|---|
標準規(guī)格 | |||
2.1×30 | 不銹鋼 | 0.1 | 271120980-2103S |
定制規(guī)格 | |||
2.1×50 | 不銹鋼 | 0.17 | 271120980-2105S |
4.6×35 | 不銹鋼 | 0.58 | 271120980-4603S |
4.6×50 | 不銹鋼 | 0.83 | 271120980-4605S |
4.6×100 | 不銹鋼 | 1.66 | 271120980-4610S |