賽分科技TweenTrap 色譜柱是專(zhuān)為去除水性樣品中的表面活性劑(例如吐溫)而設(shè)計(jì)的。填料是由剛性、球形、高交聯(lián)度、粒徑為5 µm的PS/DVB制成。將專(zhuān)有的表面涂層共價(jià)鍵合到PS/DVB載體上,從而實(shí)現(xiàn)極高的穩(wěn)定性及對(duì)目標(biāo)化合物的最小非特異性結(jié)合。共價(jià)結(jié)合的兩親官能團(tuán)能夠吸附脂溶性和水溶性的去污劑(例如吐溫)。色譜柱兼容于大多數(shù)水相緩沖液,比如醋酸鹽、磷酸鹽、Tris和其他。
TweenTrap 色譜柱可以與SEC色譜柱串聯(lián)運(yùn)行水性樣品,并且專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)用于收集和去除表面活性劑,比如干擾蛋白質(zhì)SEC定量分析的聚山梨酯 80/20(吐溫 80/吐溫20)。為了獲得最佳結(jié)果,建議TweenTrap運(yùn)行水基流動(dòng)相,不添加有機(jī)溶劑。
產(chǎn)品名稱(chēng) | TweenTrap |
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填料 | 高度交聯(lián)的PS/DVB樹(shù)脂載體接枝有致密堆積的納米級(jí)厚度兩親涂層 |
粒徑 | 5 µm |
孔結(jié)構(gòu) | 無(wú)孔 |
pH穩(wěn)定性 | 2-13 |
操作溫度極限 | 80℃ |
操作壓力極限 | 5000 psi(344bar) |
流動(dòng)相兼容性 | 典型緩沖液:磷酸鹽、Tris和乙酸鹽。有機(jī)添加劑會(huì)洗掉Tween和其他表面活性劑 |
流速 | 色譜柱內(nèi)徑為4.6 mm時(shí)通常為0.1-1.0 mL/min |
吐溫 80 濃度 | 進(jìn)樣體積 | #達(dá)到色譜柱容量之前的進(jìn)樣量 |
0.01% | 100 µL | 20 |
0.04% | 100 µL | 5 |
如圖1和圖2所示,賽分Tween Trap色譜柱在市售重組單克隆抗體(mAb)西妥昔單抗的二聚體與單體分布的譜圖中能夠最小化吐溫的干擾。
色譜柱: TweenTrap
流動(dòng)相: 150 mM Sodium phosphate, pH7.0
流速: 1 mL/min
柱溫: 室溫
檢測(cè)波長(zhǎng): UV 214 nm
進(jìn)樣體積: 100 µL
樣品: 如圖所示
線(xiàn) 1 顯示了單獨(dú)西妥昔單抗的 SEC分析(不含吐溫)。單體前面可以看見(jiàn)清晰的聚集峰。
線(xiàn) 2 顯示了0.04% 吐溫80中西妥昔單抗的SEC分析(未串聯(lián)TweenTrap色譜柱)。根據(jù)只含吐溫80的色譜圖(線(xiàn) 3 ),聚集峰的左邊肩前應(yīng)該是吐溫80。這表明吐溫80可能會(huì)干擾西妥昔單抗的定量分析。
線(xiàn) 5顯示了吐溫80干擾最小化的曲線(xiàn),這是由于串聯(lián)了賽分TweenTrap色譜柱。以同樣的色譜柱條件再運(yùn)行一遍僅含西妥昔單抗、不含吐溫80的樣品,進(jìn)一步證明了這一點(diǎn) (線(xiàn) 4)。
因此,圖1和圖2中的色譜疊加圖有助于證明西妥昔單抗樣品中吐溫80是如何被截留在賽分TweenTrap色譜柱上,同時(shí)仍然可以有效的分辨和積分聚集峰??梢钥吹轿魍孜魡慰咕奂w在所有線(xiàn)上的峰型略有不同,這可能歸因于TweenTrap色譜柱上西妥昔單抗聚集體的相互作用,或者是因?yàn)樵黾恿松V柱死體積,用戶(hù)可能需要對(duì)這種效果采取預(yù)防措施。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 內(nèi)徑*長(zhǎng)度 | 訂貨號(hào) |
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TweenTrap | 4.6×35mm | 010054-4603 |